成功的實驗是個循序漸進的過程影響EL ISA實驗結(jié)果的因素有很多只有的掌握了實驗的細(xì)節(jié)才能購做出好的實驗。 您可知您的ELISA試劑盒實驗為什么會失敗?下面酶聯(lián)生物帶大家了解一下。
一、標(biāo)本的影響
溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用E1 ISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)在洗滌過程中往往難以洗脫它可使H202釋放出原生態(tài)氧 (0)從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺可溶性的有色物質(zhì)即顯藍色產(chǎn)生假陽性。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
二、標(biāo)本受細(xì)菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶因此 被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本樣 亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
三、標(biāo)本保存不擋
在冰箱中保存過久的標(biāo)本在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深 造成假陽性;為克服 上述干擾ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定5d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4°C,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存 ;凍存后融解的標(biāo)本 蛋白質(zhì)局部濃縮分布不均 應(yīng)充分混合后再測定但混勻時應(yīng)輕柔不可強烈振蕩。
四、標(biāo)本凝固不全
在工作中有時為了爭取時間快速檢測 常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清使血清中仍殘留部分纖維蛋白原 在EL ISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊易造成假陽性結(jié)果 ;因此血波標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
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以上是酶聯(lián)生物帶您了解ELISA試劑盒實驗失敗的原因，您知道了嗎？
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