名  稱：25(OH)D3 ELISA試劑盒（酶聯(lián)免疫檢測(cè)法）

規(guī)  格：96T/48T

說(shuō)明書(shū)：48孔配置一份/96孔配置一份

用  途：僅供使用

服  務(wù)：多年代測(cè)服務(wù)，質(zhì)量保證

品　牌：酶聯(lián)生物

操作步驟：

1．取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2．分組：取出96孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理，分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

3．加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中，空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中加入50ul的待測(cè)樣本。

4．加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入100ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。

5．溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。

6．洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干。

7．顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

8．終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。

9．讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值。

實(shí)驗(yàn)規(guī)則：

1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過(guò)2%，可用水和電子天平進(jìn)行確定，但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支，吸取不同的液體后，要更換槍頭，即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。

3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。

4、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存。

5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

6、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

7、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。

8、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體，也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

9、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

10、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加*，沒(méi)有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。

11、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液，加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。

12、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

13、檢測(cè)前，要打開(kāi)酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

14、底物有一定的毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。

15、待檢樣品要澄清，否則會(huì)影響結(jié)果。

16、溫浴時(shí)間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。

17、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

18、對(duì)結(jié)果有疑問(wèn)的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。

25(OH)D3 ELISA試劑盒（酶聯(lián)免疫檢測(cè)法）由上海酶聯(lián)生物提供，包括25(OH)D3 ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)，酶聯(lián)免疫檢測(cè)

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